Методические рекомендации по оценке действия и потенциальной опасности пестицидов для медоносных пчел

РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ НАУК

МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

ПО ОЦЕНКЕ ДЕЙСТВИЯ

И ПОТЕНЦИАЛЬНОЙ ОПАСНОСТИ ПЕСТИЦИДОВ

ДЛЯ МЕДОНОСНЫХ ПЧЕЛ

СОГЛАСОВАНО УТВЕРЖДАЮ

Заместитель руководителя Академик-секретарь

Департамента ветеринарии отделения ветеринарной

Минсельхоза РФ медицины РАСХН

В.В.Селиверстов _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ А.М.Смирнов

"_ _" _ _ _ _ _ 2000 г. "_ _" _ _ _ _ 2000 г.

Москва 2001

Настоящие рекомендации разработаны сотрудниками специализированных лабораторий ВНИИВСГЭ, ВИЭВ и НИИ пчеловодства.

Утверждены секцией "Патологии пчел, рыб и других гидробионтов" отделения ветеринарной медицины РАСХН.
Методические рекомендации предназначены для государственных научно-исследовательских ветеринарных учреждений, занимающихся вопросами ветеринарной апитоксикологии и экологии.

Ответственный за выпуск - ученый секретарь отделения ветеринарной медицины РАСХН В.Н. Скира.

В В Е Д Е Н И Е

Рекомендуемые средства защиты растений (СЗР) в условиях практического их использования не должны оказывать значительного отрицательного влияния на медоносных пчел и полезную энтомофауну. Поэтому при регистрации препаратов представляются сведения по оценке их опасности для медоносных пчел и при возможности - для других полезных насекомых-опылителей (шмелей, осмий, мегахил и пр.)

С целью унификации подходов по экотоксикологической оценке воздействия СЗР на медоносных пчел, снижению материальных и временных затрат на проведение исследований в основу настоящих нормативов и методик положены Директивы Постоянной комиссии по защите растений 96/12 ЕЭС, а также используемые в большинстве европейских государств и в нашей стране аналогичные способы их оценки.

Настоящие нормативы включают обязательные для выполнения исследования. Вместе с тем, в ряде случаев требуется использование специальных методов оценки пестицидов.

Определение опасности пестицидов проводят по схеме: анализ представленных документальных данных, проведение необходимых исследований, определение степени опасности препарата для пчел и его классификация, выдача рекомендаций по предупреждению возможного ущерба для пчел. Однако, следует учитывать, что никакой отдельный метод исследования не может обеспечить получения полной информации, необходимой для классификации побочного эффекта воздействия СЗР на пчел. Истинное влияние пестицида оценивается только практикой его длительного практического применения.

Представленные методы исследования действия пестицидов на медоносных пчел могут быть использованы для оценки их влияния и на других полезных насекомых-опылителей.

I. ОЗНАКОМЛЕНИЕ С ИНФОРМАЦИЕЙ О ПЕСТИЦИДЕ

При анализе представленных документальных материалов по препарату обращают особое внимание на следующие его характеристики:

1.1. Название, препаративная форма, назначение, перечень обрабатываемых культур и время применения.

Испытания не требуются для несистемных препаратов, предназначенных для обработки семян, посадочного материала и почвы; довсходовых гербицидов и регуляторов роста растений; препаратов, используемых в зимний период или применяемых в теплицах без насекомых-опылителей и в хранилищах; препаратов, используемых в ловушках для грызунов и т.п., когда попадание пестицида в/на цветущие растения исключается.

1.2. Физико-химические, биологические свойства и регламент применения, включая:

структурная и эмпирическая формулы, химический класс и механизм действия активного вещества;
химическая чистота, растворимость в воде и органических растворителях, константа диссоциации, персистентность, коэффициент соотношения n-октанол/вода, давление паров (степень летучести) технического продукта;
качественный и количественный состав препаративной формы;
продукты распада, возможность формирования токсичных метаболитов в окружающей среде;
период детоксикации, полураспада в окружающей среде, фотолиз, гидролиз (степень его зависимости от рН);
возможности дрейфа в почве, утечки по дренажам, выщелачивания;
аналоги и практика их применения в России или других государствах;
основные параметры токсичности для теплокровных животных;
МДУ остаточных количеств действующего вещества в продуктах питания (важны для оценки остатков в продуктах пчеловодства)
эффекты воздействия на других (кроме медоносной пчелы) полезных насекомых
технология применения, максимальные нормы расхода, кратность и сроки применения, другие особенности целевого использования

На основании приведенных данных можно ориентировочно представить вероятную степень опасности используемого пестицида для медоносных пчел и определить дальнейший ход исследования. Наиболее опасны для пчел препараты, рекомендуемые для применения по цветущим растениям, особенно относящимся к энтомофильным культурам. Пестициды, применяемые в микрогранулах или порошках (могут заноситься пчелами-сборщицами вместе с пыльцой в улей) требуют определения их остаточных количеств в перге и исследования влияния на личинок пчел. Препараты системного действия и регуляторы роста насекомых, помимо лабораторных испытаний (определения величины ЛД₅₀ острого контактного и орального воздействия, а при показаниях и других данных), должны проходить соответствующие исследования непосредственно на семьях пчел.

II. ЛАБОРАТОРНЫЕ ИСПЫТАНИЯ

Проведение лабораторных испытаний является необходимым и обязательным условием для оценки действия пестицидов на медоносных пчел, определения степени их опасности. Результаты лабораторных испытаний позволяют определить ход дальнейших исследований и с определенной долей вероятности классифицировать испытываемые препараты, обосновать мероприятия по предупреждению возможного отрицательного их воздействия их на полезную энтомофауну.

2.1. Общие требования

2.1.1. Подготовка пчел

Используют предпочтительно молодых взрослых рабочих пчел одинакового возраста. Пчелы должны происходить из здоровой семьи с хорошей пчелиной маткой и с достаточными запасами корма. Пчел собирают с рамок без расплода или с прилетной доски улья. Следует избегать отбора пчел ранней весной или поздней осенью. Пчелы могут быть также выведены в инкубаторе, при условии обеспечения их свежей или хорошо сохранившейся пыльцой/пергой и раствором сахара. Следует указывать использованный метод сбора, возраст, расу пчел (при возможности) и дату проведения эксперимента.

Обездвиживание пчел может быть обеспечено двуокисью углерода. При этом используют минимальное количество СО₂ и минимальную экспозицию, обеспечивающие необходимую анестезию насекомых.

2.1.2. Условия проведения испытаний

Пчел помещают в чистый, хорошо вентилируемый садок для содержания. Нельзя использовать пластиковые садки, бывшие в аналогичных испытаниях с другими химическими продуктами, т.к. возможно их химическое загрязнение. Необходимо избегать повторного использования деревянных садков, если только они не очищены особым образом и не стерилизованы. Лучше использовать одноразовые садки, например, картонные со съемной крышкой и двумя сторонами, затянутыми сеткой. Садки не должны быть причиной гибели пчел в контроле. После обработки пчел содержат при температуре 25+2⁰С и относительной влажности 60-70%.

Температура испытываемого вещества должна быть не ниже температуры садка с пчелами.

Обработки проводят производственным продуктом и его действующим веществом. Следует предусмотреть контроли: обработка растворителем (при необходимости), соответствующим рекомендованным референтным продуктом для проверки постоянства результатов (напр. высокотоксичные для пчел паратион, диметоат) и чистый контроль - без обработки пчел.

Доза испытуемого вещества задается 10 пчелам индивидуально или группе, включающей самое меньшее 10 пчел. В опытах по п.п. 2.5. и 2.6.2. количество пчел в садках должно быть не менее 100. Пчелы не должны содержаться поодиночке более 1 часа.

Для каждой концентрации (дозы) испытуемого вещества используют самое меньшее три группы по 10 (или больше, но равное во всех повторностях) пчел.

Используют ряд концентраций, подходящий для того, чтобы вывести линию регрессии и определить ЛД₅₀.

2.2. Определение острой оральной и контактной токсичности

Основным направлением опасного воздействия остро токсичных веществ является их контактное действие. Контактная ЛД₅₀ - наиболее важная величина при оценке инсектицидов, тогда как оральная ЛД₅₀ является наиболее важной величиной для оценки веществ, не являющихся остро токсичными, таких как гербициды, фунгициды.

В лаборатории оценивают оральную и контактную токсичность исследуемого вещества для взрослых рабочих пчел. Их подвергают воздействию различных доз вещества путем скармливания, топикального нанесения или контакта с обработанной поверхностью при групповом воздействии. Величину смертности используют для построения линии регрессии и определения ЛД₅₀.

2.2.1. Определение оральной токсичности

2.2.1.1. Испытуемый(е) продукт(ы)

Используют формуляцию препарата и его действующее вещество, каждое в смеси с 20-50% раствором сахара. Если возможно, смешивают с раствором сахара без использования дополнительных химических растворителей.
2.2.1.2. Способ скармливания
Пчел не кормят в течение 2-х часов перед опытом. При индивидуальном скармливании 10 или 20 мкл опытного раствора для каждой пчелы задают с помощью стеклянной трубки. При групповом скармливании пчелы берут опытный раствор сахара самостоятельно, обмениваются кормом друг с другом и, таким образом, получают усредненные дозы. После опытного кормления пчел обеспечивают чистым раствором сахара и меняют его ежедневно, если опыт продолжается 48 часов.

2.2.2. Определение контактной токсичности

2.2.2.1. Испытуемый(е) продукт(ы)

Если возможно, вещество растворяют в ацетоне. В противном случае используют другие растворители.
2.2.2.2. Способ индивидуального нанесения
Анестезированных пчел обрабатывают путем топикального нанесения испытуемого вещества. Точно отмеренное количество продукта наносят на грудь каждой пчелы. После нанесения дают пчелам свежий раствор сахара и меняют его ежедневно, если опыт продолжается 48 часов. Пчелам контрольной группы наносят на грудь такое же количество растворителя. Обработанных пчел возвращают в садки.
2.2.2.3. Определение острой токсичности при групповом воздействии на пчел проводят по п.2.6.1.

2.2.3. Способ оценки

Подсчитывают число погибших и пораженных (пострадавших) пчел через 24 и 48 часов или больше (если смертность постепенно возрастает).

2.2.4. Результаты

Если смертность в чистом контроле значительна (больше 15%) или гибель от испытуемого средства выше, чем от остро токсичного референтного препарата, необходимо повторить опыт. После коррекции на смертность в контролях подсчитывают смертность и, проанализировав соответствующими статистическими методами, вычисляют величину средней летальной дозы (ЛД₅₀), выражая ее в мкг действующего вещества или препаративной формы на 1 пчелу.

2.3. Определение острого фумигантного действия

(для веществ, обладающих выраженной летучестью при 20^оС)
Чистые чашки Петри заполняют наполовину раствором испытуемого препарата в рекомендуемой рабочей концентрации; садки с пчелами устанавливают сверху непосредственно на края чашек так, чтобы испарения испытываемого вещества проникали через перфорированное дно садка внутрь. Экспозиция - 8 часов.

Садок с контрольными пчелами устанавливают над чашкой Петри с растворителем или водой.

Подсчитывают число погибших и пораженных пчел через 24 и 48 часов или больше (если смертность постепенно возрастает), в опытных и контрольных садках.

2.4. Определение репеллентной активности

(для веществ, ЛД₅₀ которых менее 10 мкг/пч)
Исследование репеллентных свойств препаративной формы проводят путем одновременного группового скармливания опытных растворов сахара с различными концентрациями препарата в садках с 5-6 пробирочно-вакуумными кормушками. Это позволяет испытывать одновременно до 5 концентраций препарата в сравнении с чистым контролем (раствор сахара без препарата). О репеллентных свойствах препарата судят по расходу корма в отдельных кормушках за 48 часов и рассчитывают Коэффициент Защитного Действия (КЗД) по формуле:

КЗД = 100 - (О х 100 / К) %

где:

О - количество сахарного сиропа, потребленного пчелами из опытной кормушки;

К - количество сахарного сиропа, потребленного пчелами из контрольной кормушки;

Расчет КЗД делается для каждой испытанной концентрации

2.5. Определение хронической оральной токсичности при групповом скармливании

(если ЛД₅₀ действующего вещества и препаративной формы при остром оральном и контактном действии менее 100 мкг/пчелу, а также для веществ, приводящих к увеличивающейся гибели пчел к 48 часам наблюдения в сравнении с 24 часами)
Используют смесь меда с водой (1:1) или раствор сахара (2:1); в вертикальных кормушках, закрытых пластиковыми пробками с кормовыми отверстиями. Корм содержит 1/2, 1/4 и при возможности меньшие части ранее определенной максимально переносимой концентрации/дозы (ЛД₂) действующего вещества и/или препаративной формы. Ежедневно проводят учет гибели пчел до тех пор, пока не погибнет половина или большая часть насекомых; по результатам наблюдений определяют показатель средней продолжительности жизни пчел для каждой концентрации пестицида по формуле:

Пж = (а1 + а2 + а3 + ... аn) / N,

где:

а1, а2, аn - число живых пчел после 1, 2, n дней скармливания опытного корма;

N - число первоначально взятых в опыт пчел;

Контрольные пчелы постоянно получают чистый раствор сахара, который ежедневно меняют на свежеприготовленный.

2.6. Определение контактной токсичности при групповом воздействии.

Показатели острого контактного действия испытуемого вещества могут быть также определены на группе пчел, при этом одновременно можно установить продолжительность токсического действия препаративной формы при контакте с обработанной поверхностью.

2.6.1. Острая контактная токсичность при групповом воздействии.

На матовое стекло, соответствующее размерам дна садка, наносят 1 мл раствора препарата в рекомендуемой рабочей концентрации (или раствор адекватного количества действующего вещества), высушивают на открытом воздухе в естественных условиях. Затем его помещают на дно специального садка (экспозиметра) с пчелами. Обеспечивают принудительное контактирование пчел с поверхностью стекла в течение 30 минут. Затем пчел переносят в чистый садок для дальнейших наблюдений.

2.6.2. Определение продолжительности остаточного действия препарата на стеклянной поверхности.

(для веществ, ЛД₅₀ которых менее 10 мкг/пч)
Использованное в опыте по п.2.6.1. обработанное стекло хранят на открытом воздухе под навесом и периодически используют для принудительного контактирования новых групп пчел. По результатам учета гибели пчел в опыте п.2.6.1. и в последующие дни определяют длительность остаточного действия препарата в сутках. Контрольные пчелы в обоих опытах (п.п. 2.6.1. и 2.6.2.) контактируют со стеклом, обработанным использованным в опыте растворителем или водой.

2.6.3. Ориентировочное определение времени детоксикации пестицида на растениях.

В поле, обработанном испытуемым препаратом, сразу после обработки, затем через 24, 48 и более часов после ее проведения срезают отдельные части растений.

Мелкие фрагменты растений помещают в энтомологические садки с пчелами, определяют продолжительность жизни пчел в садках содержащих растения, определенного срока сбора, ежедневно на протяжение 48-72 часов.

Контрольных пчел содержат в садках, куда помещают необработанные препаратом такие же растения, собранные в те же сроки; учитывают гибель пчел.

2.7. Оценка опасности пестицида в условиях регламентированного применения по результатам лабораторных исследований.

2.7.1. Определение класса токсичности действующего вещества и препаративной формы в лабораторных условиях.

Острая контактная и оральная токсичность (ЛД₅₀) близки по своим величинам. Большие отклонения могут свидетельствовать об ошибочности данных.

Для определения класса токсичности принимают во внимание наименьшую величину ЛД₅₀ острого контактного или орального воздействия.

Классы токсичности Величина ЛД50 (мкг/пчелу)

Чрезвычайно высоко токсично	I		< 0,1
Высоко токсично	II	от 0,1	до 1,0
Умеренно токсично	III	от 1.1	до 10
Слабо токсично	IV	от 10.1	до 100
Практически не токсично	V	> 100

Значение ЛД₂ является предельно допустимой величиной гибели взрослых пчел вследствие острого отравления, не отражающейся на последующей жизнедеятельности семей. При сравнении этой величины с объемами вносимого действующего вещества (препаративной формы) на 1 га обрабатываемой площади можно дополнительно судить о степени опасности пестицида для пчел. Величину ЛД₂ определяют по линии регрессии.

2.7.2. Определение коэффициентов риска (КР) контактного (КРк) и орального (КРо) воздействия и класса опасности пестицида.

Для определения КР берется максимально рекомендуемая гектарная норма препарата в граммах действующего вещества на 1 га и наименьшие величины ЛД₅₀ в мкг /пчелу при контактном и оральном воздействии. При проявлении более высокой токсичности препаративной формы в сравнении с действующим веществом для определения коэффициента риска берут максимально рекомендуемую гектарную норму препарата в граммах на 1 га и наименьшие величины ЛД₅₀ препаративной формы в мкг/пчелу при контактном и оральном воздействии. Пестициды, содержащие смесь действующих веществ, оцениваются по токсичности и норме расхода препаративной формы.

Расчет КР проводят по формуле:

КРк = Максимальная гектарная норма / ЛД₅₀ контактного действия

КРо = Максимальная гектарная норма / ЛД₅₀ орального действия

По наибольшей величине КР определяют класс опасности:

Класс опасности Величина КР

Высоко опасен	I	> 50
Средне опасен	II	26-50
Мало опасен	III	< 25

2.7.3. Оценка остаточной токсичности препарата в лабораторных условиях.

Остаточную токсичность препарата оценивают по показателям его токсичности при контакте пчел с обработанной стеклянной поверхностью или поверхностью обработанных растений, по длительности проявления фумигантного действия (при его наличии).

По этому показателю пестициды можно разделить на две группы -

остаточная токсичность низкая, если 50% пчел погибает в первые 8 часов воздействия препарата и в последующем к окончанию 24 часов гибель снижается - ОТ₅₀ < 8 часов;
остаточная токсичность высокая - ОТ₅₀ > 8 часов.

2.7.4. Выраженность репеллентной активности (коэффициент защитного действия - КЗД)

По репеллентной активности можно выделить следующие группы пестицидов:

Группы КЗД

выраженная 25-75

слабая < 25

отсутствует = 0

2.7.5. Показатели оральной хронической токсичности.

Определяют среднюю продолжительность жизни опытной группы пчел (М+м) в сравнении с контролем в сутках для каждой дозы препарата. Достоверность различий в показателях должна быть определена методами вариационной статистики.

На основе анализа могут быть выделены группы пестицидов:

обладающие хронической токсичностью
не обладающие хронической токсичностью.

2.8. Комплексная оценка действия пестицида по результатам лабораторных испытаний и принятие решения.

По результатам лабораторных испытаний пунктов 2.7.1-2.7.5. могут быть приняты решения:

1. О прекращении дальнейших исследований, при условиях, что испытуемое средство:

не используется на стадиях бутонизации и цветения растений; не относится к препаратам системного действия, регуляторам роста насекомых и не представляет опасности для пчел по каким-либо другим соображениям;
обладает выраженным репеллентным действием на пчел (КЗД = 25-75) в течение времени сохранения препарата в окружающей среде;

или:

имеет сочетанный комплекс лабораторных показателей;
величина ЛД₅₀ при контактном и оральном воздействии >100 мкг/пчелу;
коэффициент риска < 50;
фумигантная токсичность отсутствует
остаточная устойчивость - ЛТ₅₀ < 8 часов

или:

имеет другие сочетания показателей, когда токсичность препарата гарантированно
резко снижается за счет его малой устойчивости, репеллентности, времени применения, обеспечивающие распад пестицида и т.д.; при отсутствии подозрений на другие возможные виды отрицательного воздействия препарата на пчел.

2. Во всех остальных случаях и при возникновении трудностей интерпретации результатов лабораторных исследований необходимы дальнейшие испытания на семьях пчел.

III. ИСПЫТАНИЯ НА СЕМЬЯХ ПЧЕЛ

Выявленное в лабораторных исследованиях влияние препарата на пчел может быть уточнено опытами в изоляторах, что позволяет ускорить классификацию пестицида. Более полные данные получают в туннельных опытах. Испытания в изоляторах и туннелях чаще используют для оценки малоопасных пестицидов. В туннелях также возможно проведения опытов со средне опасными средствами, оценивая риск препаратов для пчел при сборе ими медвяной росы, выделяемой злаковой тлей. Вместе с тем, следует учитывать, что воздействие изучаемого средства на пчел в этих условиях более интенсивно, чем при полевых испытаниях.

Полевые опыты служат для классификации остальных пестицидов, особенно препаратов, коэффициенты риска которых по лабораторным испытаниям приближаются к верхней границе (Кр = 2500) и превышают ее. Если проведены полевые испытания, то опыты в изоляторах (туннелях) не являются необходимыми. Выявленные полевыми опытами специальные эффекты (токсичность для личинок, длительное остаточное действие, отдаленное действие пестицида на пчел, дезориентация насекомых и т.д.) могут потребовать дальнейших исследований с использованием специфических методов.

3.1. Испытания в изоляторах

3.1.1. Принцип испытания

Пчел маленьких семей вынуждают фуражировать на цветущей растительности в полевых изоляторах. Испытываемые продукты и контрольный (референтный) продукт с известной высокой опасностью для пчел разбрызгивают в отдельных изоляторах во время активного лёта пчел, в то время как другой изолятор оставляют как контрольный. В случае, если условия испытания не позволяют использовать референтный продукт, то следует продемонстрировать риск для пчел каким-либо другим образом. Эффект обработки пчел оценивают несколько раз.

3.1.2. Условия испытания.

Используют изоляторы минимального размера 2х2х3 м. Изолятор должен быть покрыт сеткой с максимальным размером ячейки 3 мм. Для удержания пчел может быть использовано также пластиковое покрытие крыши.

Изоляторы, в которых предполагают использовать испытываемый продукт, референтный продукт с заведомо известной высокой опасностью для пчел и чистый контроль, ставят на цветущие растения - огуречная трава, фацелия, горчица и другие культуры, привлекательные для пчел.

В каждом изоляторе используют одну маленькую семью с хорошей маткой и силой не менее трех полных рамок пчел. Семью помещают в изолятор за четыре дня до опыта. Следует избегать проникновения в изолятор пчел с поля, обычно погибающих из-за удерживания их потолком. Во время испытаний иногда необходимо подкармливание семей.

Обработки - испытуемый продукт(ы), референтный продукт с известной высокой токсичностью для пчел (например паратион, диметоат) и контроль без продукта для защиты растений. Контроль может быть обработан распылением воды или же такая обработка может не проводиться.

Единица опыта - изолятор с одной семьей.

Повторности - достаточные для проведения соответствующего статистического анализа.

3.1.3. Внесение веществ.

Используют только испытываемую препаративную форму. Продукты вносят днем, когда пчелы летают. Избегают опрыскивания стенок изолятора, передней стенки и летка улья.

Продукт должен быть применен в наивысшей рекомендуемой дозе; при желании дополнительно может быть испытана увеличенная доза.

3.1.4. Способ оценки.

Во время проведения испытаний регистрируют собирательную активность и поведение пчел на посевах вокруг улья до обработки, в течение первого дня и через 1, 2, 4 и 7 дней после обработки. Подсчитывают число пчел, погибших в специальных уловителях, умирающих в улье и на почве внутри изолятора. Проводят оценку влияния препарата на расплод, пчелиную матку, снимают другие параметры "показательные" для экспертной оценки. Ежедневно определяют температуру, влажность воздуха, облачность, осадки, скорость ветра.

Повторяют опыты. Смертность в опытном изоляторе должна быть больше на 15%, чем в чистом контроле, и ниже в сравнении с обработкой референтным препаратом. Результаты должны быть анализированы общепринятыми статистическими методами.

3.2. Туннельные опыты.

Обязательны для оценки действия пестицидов на медоносных пчел, собирающих падевые выделения, секретируемые злаковыми афидами. Возможно также использование их для более углубленной оценки воздействия пестицидов на пчел взамен опытов в изоляторах.

3.2.1. Принцип испытания.

Участки злаковых, растущих в поле, покрывают нейлоновыми сетчатыми туннелями. Падевые выделения имитируют высокообъемными каплями раствора сахара. Пчелы из маленькой семьи внутри туннеля собирают капли раствора сахара. Опытный продукт и референтные продукты с высокой и низкой токсичностью для пчел разбрызгивают в отдельных туннелях во время лета пчел. Эффект от обработок оценивают незадолго до этого и несколько раз после обработки.

3.2.2. Условия для проведения испытания.

На краю поля выбирают участок, плотно засеянный цветущей пшеницей или другим растением-медоносом. Посев накрывают полукруглым туннелем (длина - 16 м, ширина - 5 м, высота - 2 м), состоящим из сборной трубчатой металлической конструкции, покрытой не пропускающей пчел нейлоновой сеткой. Накрытый посев внутри туннеля четкими проходами разделяют на 4 участка: два площадью 13,5 м² (9х1,5 м) для испытания препаративной формы в наивысшей рекомендуемой концентрации и два площадью по 6 м² (4х1,5 м) для контроля (вода). Каждую группу участков располагают по концам туннеля и разделяют проходом шириной 2,5 м, между каждым участком в группе создают проход шириной 1,5 м. Опытные и контрольные участки изолируют поднимающимися плотными полиэтиленовыми шторами, препятствующими не планируемому перелету пчел. В аналогичных туннелях испытывают референтные продукты с известной высокой токсичностью (диметоат, паратион), и малоопасный для пчел пестицид в рекомендуемой для использования концентрации и дозе. В разделительном пространстве между большими и малыми участками к стенке туннеля помещают небольшую семью (5 рамок расплода, 4-8 тыс. взрослых пчел), перед летком улья помещают ловушку для сбора погибших пчел или лист полиэтиленовой пленки (1х1 м). Пчел обеспечивают необходимыми количествами воды и пыльцы в чашках Петри, укрепленных на подставках на максимальной высоте посева на каждом участке. Семьи заносят в туннели за 3-5 дней до опыта.

3.2.3. Внесение веществ.

Опыт проводят при устойчиво сухой погоде. За 1-2 суток до применения пестицидов утром на все участки пшеницы (медоноса) наносят с помощью ручного опрыскивателя водный раствор сахара (500 г/л) в объемах 300 мл/м². В последующем большие опытные участки утром при лете пчел обрабатывают испытываемым препаратом в рекомендуемой концентрации и дозе; контрольные небольшие участки обрабатывают водой при той же дозе внесения жидкости на гектар. Одновременно проводят аналогичные работы с референтными опасными и не опасными для пчел препаратами в отдельных туннелях.

3.2.4. Способ оценки.

За три дня до опыта и минимум в течение 2-х последующих дней его проведения ежедневно утром и вечером через определенные промежутки времени (10 минут, 1-2-3-4-5 часов учитывают на каждом участке число фуражирующих на растениях пчел, число погибших особей в ловушке (на листе перед ульем), а также на грунте под растениями на каждом участке. В периоды учета измеряют температуру и относительную влажность воздуха внутри туннеля, учитывают осадки, облачность, скорость ветра. После выноса семей пчел из туннеля каждые 2 недели в течение последующего месяца семьи подвергают тщательному осмотру, оценивают число взрослых пчел в улье, наличие жизнеспособной пчелиной матки, площадь развивающегося расплода. Из улья периодически могут отбираться пробы меда и воска для определения остаточных количеств препарата. Опыт повторяют. Результаты анализируют общепринятыми статистическими методами.

3.3. Испытания на отдельных семьях пчел.

Метод обязателен для оценки воздействия регуляторов роста насекомых, может быть использован при соответствующих показаниях для определения действия на расплод пчел других пестицидов.

3.3.1. Принцип испытания.

Семьям медоносных пчел скармливают испытываемый инсектицид - регулятор роста насекомых (РРН) в количестве 1 л на семью в концентрации, рекомендуемой для использования в поле. РРН дают в сахарном сиропе. Референтный РРН и чистый сахарный сироп скармливают одновременно другим семьям. Развитие расплода контролируют еженедельно, учитывая индивидуально ячейки расплода; изучают смертность взрослых пчел и расплода, используя ловушку для погибших пчел перед ульем.

3.3.2. Условия испытания.

Используют здоровые, хорошо кормящиеся, с плодной маткой семьи, содержащие 10-15 тыс. пчел (в зависимости от сезона года). В каждой семье пчелы должны покрывать самое меньшее 10 рамок, включая 5-6 рамок расплода. Если семьи различаются в размерах, то их равномерно распределяют по группам.

Пчелы опытных семей должны свободно летать, имея доступ к естественным источникам нектара. Естественного нектара не должно быть много (поддерживающий медосбор), при этом пчелы должны использовать для кормления личинок сахара, контаминированного инсектицидом, больше чем поступает свежего нектара с растений. Испытания могут быть проведены в течение всего сезона нормального сбора нектара и развития расплода медоносных пчел. В гнезде пчел должны присутствовать все стадии расплода (яйца, молодые, взрослые личинки, куколки).

Испытываемые вещества - опытный продукт, референтный продукт (РРН, у которого отношение доза/продукт к расплоду пчел известно, например феноксикарб, дифлюбензурон), контроль без пестицидов (чистый раствор сахара).

Единица опыта - здоровая семья средней силы.

Повторности - по меньшей мере 3 семьи на продукт и на концентрацию; контрольные семьи пчел. Все семьи должны быть размещены в одном месте.

3.3.3. Внесение средств.

Используют только препаративную форму. Кормление всех семей начинают одновременно, предпочтительно вечером, чтобы предупредить напад пчел. Скармливают 1 литр раствор сахара (50%) на семью до потребления. Пчелам, заканчивающим потребление данного количества, новую порцию раствора сахара не добавляют. В норме корм должен быть забран пчелами семей в течение 24 часов.

РРН вносят в семью однократно. Изучаемый продукт скармливают в высших рекомендуемых концентрациях. Если позволяют возможности, то в опытах изучают также наиболее низкую и более высокую концентрации. Референтный продукт, действие которого известно, дают в более низких концентрациях, чем минимальные рекомендуемые нормы применения в полевых условиях.

3.3.4. Способ оценки.

За день (но не более чем за 24 часа) перед началом скармливания в каждой семье на рамке из центра гнезда отмечают как минимум 100 ячеек с яйцами, 100 ячеек с молодыми личинками и 100 ячеек со взрослыми (4-5-дневными) личинками с помощью накладываемого сверху прозрачного листа пленки, на котором цветовым кодом фиксируют расположение и число ячеек с яйцами, молодыми и взрослыми личинками. На чистых сотах желательно отметить ячейки. Следует избегать, если возможно, использования расплода на крайних рамках гнезда, т.к. пчелы иногда с трудом ухаживают за расположенными здесь ячейками с расплодом во время холодной погоды. Развитие расплода во всех отмеченных ячейках контролируют, используя копии первичного листа пленки (еженедельно), в течение 3 недель после внесения препарата, затем инспекцию заканчивают. На пленках показывают различные подрастающие стадии установленным цветовым кодом. Данные фиксируют в протоколе опыта.

Для учета смертности перед ульями помещают ловушки для погибших пчел; подходящими ловушками являются марлевые боксы 100х75х50 см, с открытой верхней стороной. Ловушки проверяют ежедневно, учитывают количество погибших взрослых пчел, личинок и куколок, которых исследуют в лаборатории на специфические воздействия РРН (белые края глаз, уродства). При наблюдении за семьями можно получить другие параметры: интенсивность лёта, поведение пчел, матки и т.д.

С первого дня наблюдений записывают метеорологические данные и данные по внешней среде. Сюда включают температуру (средняя, максимум, минимум), осадки (в мм), относительную влажность (max, min), облачность, скорость ветра. Данные внешней среды включают: главные источники нектара вблизи семей, время года и описание ближайшего окружения.

Опыты повторяют, если сравниваемая смертность в чистом контроле (выше 15%), а также если смертность от референтной обработки ниже, чем в опытной группе. Результаты должны быть тщательно проанализированы соответствующими статистическими методами. В отчет включают необработанные данные и всегда указывают какой статистический метод был использован.

3.4. Полевые опыты.

3.4.1. Принцип испытаний.

Семьи пчел помещают в середине или на краю большого опытного поля цветущих посевов. Поля выбирают так, чтобы пчелы могли фуражировать только на поле, на котором помещены их ульи. Опытные поля должна быть хорошо отделены от других насаждений медоносных растений. Опытный и референтный продукты с заведомо известной высокой и/или низкой токсичностью для пчел применяют на отдельных опытных полях во время массового лета пчел. Если опытные условия не допускают использования опасного референтного препарата, то следует показать каким-либо другим методом риск такой обработки для пчел. Действие обработок на пчел оценивают по параметрам, снятым незадолго перед опытом и несколько раз после обработки.

3.4.2. Условия испытаний

Опыты проводят на посевах, на которых используют предлагаемую для исследования препаративную форму. Если невозможно использовать рапс, фацелию или другие привлекающие пчел культуры, то должны быть использованы иные общепризнанные растения-медоносы. В любых случаях, посевы должны быть в стадии полного цветения.

Используют здоровые, хорошо кормившиеся, со здоровой маткой семьи, содержащие 10000-15000 пчел, соответственно сезону. В каждой семье должны быть покрыты пчелами самое меньшее 10-12 рамок, включая не менее 5-6 рамок расплода. Если семьи отличаются размером, то следует обеспечить их равномерное распределение по группам.

Семьи помещают в середине или на краю цветущих посевов, которые должны будут быть обработаны препаратом. Чтобы гарантировать фуражирование на выбранном участке в день обработки, семьи помещают туда за день до испытания, т.к. пчелы склонны начинать немедленно фуражировать в местах рядом со своими ульями.

Обработки проводят испытуемым продуктом(ами) и референтным препаратом, обладающим высоким токсическим действием на пчел (например паратион, диметоат), а также референтным продуктом, обладающим низким токсическим действием на пчел, и сопровождаться необработанным контролем.

Размер участка: самое меньшее 1500 м². Хорошо развитые семьи нуждаются в большей площади. Участки должны быть хорошо отделены друг от друга расстоянием 500-1000 м, чтобы избежать фуражирования пчел с других участков. Участки не должны быть близки к другим цветущим посевам, привлекательным для пчел.

Повторности: желательны, однако часто они невыполнимы из-за требуемой раздельности участков. Используют по 3 семьи на участок.

3.4.3. Проведение обработки

Используют только предложенную для испытаний препаративную форму. Выбирают референтные продукты из числа зарегистрированных для использования, технология применения которых подобна таковой для испытываемого продукта. Препараты должны быть внесены в наибольшей рекомендованной дозе, указанной на этикетке, для борьбы с вредителями посевов; при желании дополнительно испытывают также еще дозу, превышающую норму. Объемы внесения и размеры капель должны соответствовать рекомендованным, что указывают в протоколе испытания.

Препараты применяют днем, когда пчелы активно фуражируют на растениях. Обработку полей проводят одновременно с разницей не более 2 часов.

3.4.4. Способ оценки

Записывают температуру и влажность воздуха, учитывают облачность, осадки, скорость ветра ежедневно во время всего периода испытаний.

Оценивают и записывают следующие параметры: количество фуражирующих пчел на посевах, поведение пчел на посевах и вокруг ульев, смертность пчел (используя ловушки для погибших пчел).

Желательно также определять: сбор пыльцы (используя пыльцеуловители), запасы собранной пыльцы (перги), агрессивность и количество пчел на рамках, состояние расплода на рамках, а также остатки препарата в погибших пчелах, пыльце, воске и меде и т.д. Выбор параметров оценки, их "показательность" решается экспертом.

Оценку проводят за день (в 10, 12, 14 и 16 часов) и непосредственно перед обработкой. После обработки состояние семей оценивают несколько раз в течение первого дня, затем через 1, 2, 4, 7 и 14 дней в указанные выше часы и может продолжаться и до 12-и месяцев после обработки (учет количества погибших пчел за время зимовки, заболеваемость, результаты весенней ревизии опытных и контрольных семей).

Повторные испытания проводятся, если смертность от малоопасного референтного препарата значительно выше (на 15%), или если смертность от опасного референтного препарата ниже чем от испытуемого. Результаты должны быть хорошо проанализированы с применением статистических методов. В отчет включают также и необработанные данные и всегда указывают какой статистический метод использовался.

3.5. Комплексная оценка результатов опытов на семьях пчел

Перед постановкой опыта в изоляторах и туннелях проводят тщательный учет гибели пчел в опытных и контрольных группах. При несовпадении смертности пчел в этих группах до внесения препарата следует заменить семьи или переделать опыт. По результатам гибели пчел в опытных изоляторах (туннелях) испытанный препарат может быть отнесен к:

слабо или нетоксичным - при совпадении процента смертности с необработанным контролем;
умеренно токсичным - при гибели 11-30% пчел по сравнению с контролем;
высокотоксичным - при гибели >30% пчел по сравнению с контролем;

Принимаются во внимание также другие данные, собранные в период опыта.

Высокотоксичные (в ряде случаев средне токсичные) препараты по испытаниям в изоляторах (туннелях), средства, обладающие каким-либо отрицательным действием на пчел в этих условиях, а также пестициды из группы регуляторов роста насекомых, вызывающие пагубное воздействие на пчелиный расплод, необходимо в дальнейшем испытать в полевых опытах.

Толкование результатов полевых опытов осуществляют в два этапа: первый относится ко дню обработки и последующим дням наблюдений; второй - длится от возвращения пчел с испытаний до следующей весны.

Обработка считается мало- или неопасной, если смертность около ульев (или в ловушках) с добавлением смертности на посевах культур одинакова в опытной и контрольной группах при условии устойчивой погоды в течение периода испытаний. Обработка опасна при значительной смертности пчел и нарушении равновесия популяции семей пчел.

Помимо общего числа погибших пчел учитывают:

число запечатанного расплода в рамках,
агрессивность и активность взрослых пчел,
количественные и качественные изменения при сборе нектара и пыльцы и т.п.

На втором этапе, который начинается с момента возвращения ульев на пасеку и длится до следующей весны, пчеловод проводит дополнительные наблюдения за этими семьями с целью выявления отдаленного воздействия пестицида на них.

V. КЛАССИФИКАЦИЯ ОПАСНОСТИ ПЕСТИЦИДОВ

При исследовании в изоляторах, туннельных, полевых и специальных испытаниях важное значение имеют данные, полученные в соответствующих контролях. На отсутствие влияния окружающей среды (особенно погоды) указывает сравнение показателей подопытных пчел, подвергшихся воздействию известного референтного высокотоксичного для пчел препарата и исследуемого средства. Кроме того, сравнение показателей групп испытуемого средства с группами пчел, подвергшихся воздействию ранее классифицированных препаратов высокого и низкого риска для пчел и чистым контролем дают возможность более четко определить класс опасности изучаемого средства.

В случае противоречия данных лабораторных испытаний и опытов в изоляторах с результатами полевых тестов решающими являются последние. Вместе с тем, учитывая высокую стоимость и невозможность проведения в ряде случаев полевых испытаний, на практике приходится повышать класс опасности.

После завершения оценки опасности, базирующейся на средних данных, отражающих регламентированное использование препарата, необходимо принимать во внимание ошибки в измерениях или изменения в условиях использования препарата. Особенно это относится к продуктам, классифицированным как мало- и средне опасные для медоносных пчел. В связи с этим проводится повторная оценка по крайним величинам токсичности, нормам расхода и устойчивости, принимая во внимания результаты опытов в изоляторах и полевых опытах, предусматривается возможное возрастания риска при других вероятных условиях. Основой окончательной классификации и одобрения для использования пестицида являются данные, подтверждающие его оценку, или делается обоснованный перевод его в категорию с высоким риском, или указывается на необходимость получения дополнительной информации.

Ущерб от пестицида может быть предотвращен применением тех или иных мер защиты пчел. Рекомендованные приемы защиты, степень их ужесточения зависят от класса опасности пестицида. Однако при этом следует учитывать, что характер мероприятий по профилактике отравлений пчел зависит от выявленных особенностей препарата, поэтому те или иные рекомендации могут быть использованы, невзирая на классы, или расширены с учетом специфики действия используемого средства.

Согласно рекомендованной ЕЭС схемы принятия решений средства защиты растений относят к четырем категориям потенциального риска для медоносных пчел:

категория незначительного риска,
категория невысокого риска,
категория среднего риска,
категория высокого риска.

В принятой отечественной классификации принято различать три класса опасности; в классе малоопасных объединены категории незначительного и невысокого риска. Установленные классы опасности не распространяются на баковые смеси.

I Класс опасности - ВЫСОКО ОПАСНЫЕ*

КРк или КРо** > 50

необходимо соблюдение экологического регламента:

нанесение предупредительной надписи на этикетку препарата о его высокой опасности для пчел,
добавление репеллентов или изменение регламента применения /сроков, культур, кратности обработок и т.д./,
не обрабатывать поля, засоренные цветущими сорняками (>3 растений на 1 м²),
окашивание цветущих сорняков по периметру обрабатываемого поля на расстояние возможного сноса препарата,
проводить обработку растений вечером после захода солнца,
при скорости ветра < 1-2 м/с,
погранично-защитная зона для пчел 4-5 км,
ограничение лёта пчел на 96-120 час. или удаление семей пчел из зоны обработки на срок более 120 часов.

II Класс опасности - СРЕДНЕОПАСНЫЕ*

КРк или КРо** = 25-50
необходимо соблюдение экологического регламента:

окашивание цветущих сорняков по периметру обрабатываемого поля на расстояние возможного сноса препарата,
проводить обработку растений вечером после захода солнца,
при скорости ветра < 2-3 м/с,
погранично-защитная зона для пчел 3-4 км,
ограничение лёта пчел 48-72 час.

III КЛАСС опасности - МАЛООПАСНЫЕ*

КРк или КРо** < 25
необходимо соблюдение экологического регламента:

проводить обработку растений ранним утром или вечером после захода солнца,
при скорости ветра < 4-5 м/с,
погранично-защитная зона для пчел > 2-3 км,
ограничение лёта пчел 3-24 час.

Во всех случаях применение пестицидов требует соблюдения основных положений "Инструкции по профилактике отравления пчел пестицидами" (Москва, ГАП СССР 1989); в частности - обязательно предварительное (за 4-5 суток) оповещение пчеловодов общественных и индивидуальных пасек (средствами печати, радио и пр.) о характере запланированного к использованию средства защиты растений, сроках и зонах его применения.

* Учитывается вся возможная информация о свойствах препарата.

** КРк и КРо - Коэффициенты риска контактного и орального воздействия пестицида в условиях его регламентированного производственного использования.

V. ДОКУМЕНТАЦИЯ

Все условия проведения опытов, полученные результаты, их статистическую обработку фиксируют в специальном журнале. Каждый опыт протоколируют. После проведения испытаний составляют отчет согласно прилагаемым основным требованиям к представлению документации по ветеринарно-санитарной экотоксикологической оценке опасности пестицидов для пчеловодства.

VI. ОСНОВНЫЕ ТРЕБОВАНИЯ

К ПРЕДСТАВЛЕНИЮ ДОКУМЕНТАЦИИ

6 Ветеринарно-санитарная экотоксикологическая оценка опасности пестицида для пчеловодства.

6.1. Параметры острой токсичности действующего вещества и препаративной формы для взрослых медоносных пчел Apis mellifera.

(не требуется для несистемных препаратов, предназначенных для обработки семян, посадочного материала и почвы; довсходовых гербицидов и регуляторов роста растений; препаратов, применяемых в теплицах без насекомых-опылителей и в хранилищах; препаратов, используемых в ловушках для грызунов)

6.1.1. Острая контактная токсичность действующего вещества (ДВ) при индивидуальном или групповом воздействии:

Дозы: 0,1-1-10-100 мкг/пчелу; период наблюдений 24 и 48 час.

ЛД₂ = ЛД₅₀ = мкг/пчелу инд.

ЛД₂ = ЛД₅₀ = мг/см² грп.

ЛК₂ = ЛК₅₀ = конц. р-ра (%) грп.

6.1.2. Острая пероральная токсичность ДВ при индивидуальном или групповом скармливании:

Дозы: 0,1-1-10-100 мкг/пчелу; период наблюдений 24 и 48 час.

ЛД₂ = ЛД₅₀ = мкг/пчелу инд.

ЛК₂ = ЛК₅₀ = конц. р-ра (%) грп.

6.1.3. Острая контактная токсичность препаративной формы (ПФ) при индивидуальном или групповом воздействии:

Дозы: 0,1-1-10-100 мкг/пчелу (по ПФ); период наблюдений 24 и 48 час.

ЛД₂ = ЛД₅₀ = мкг/пчелу инд.

ЛД₂ = ЛД₅₀ = мг/см² грп.

ЛК₂ = ЛК₅₀ = конц. р-ра (%) грп.

6.1.4. Острая пероральная токсичность ПФ при индивидуальном или групповом скармливании:

Дозы: 0,1-1-10-100 мкг/пчелу (по ПФ); период наблюдений 24 и 48 час.

ЛД₂ = ЛД₅₀ = мкг/пчелу инд.

ЛК₂ = ЛК₅₀ = конц. р-ра (%) грп.

6.1.5. Фумигантная токсичность ПФ при групповом воздействии:

(не требуется для препаратов, давление пара которых при 20^оС менее 0,20 мПа)

Дозы: гектарная норма препарата в пересчете на 100 см² дна садка; экспозиция: 30 мин.; период наблюдений 24 и 48 час.

Процент гибели пчел в сравнении с контролем;

ЛД₂ = ЛД₅₀ = мг/см² грп.

6.1.6. Репеллентная активность ПФ при групповом воздействии:

Дозы: 0,1-0,01-0,001 рабочей концентрации препарата в сахарном сиропе; период наблюдений - 48 час.

Процент потребления корма с препаратом в сравнении с чистым сиропом - Коэффициент Защитного Действия (КЗД)

6.1.7. Дополнительные параметры токсичности ПФ в лабораторных условиях

(не требуется для препаратов, ЛД₅₀ ДВ и ПФ которых при топикальном и оральном воздействии более 100 мкг/пчелу)
6.1.7.1. Хроническая пероральная токсичность ПФ при групповом скармливании:

Дозы: 0,5 и 0,25 ЛК₂ при экспозиции до 30 суток.

Средняя продолжительность жизни (ПЖ) в сутках опытных групп пчел в сравнении с контролем (М+м) для каждой дозы
6.1.7.2. Продолжительность остаточного действия ПФ на стеклянной поверхности при групповом контактном воздействии:

Дозы: расходная норма препарата на 100 см²; экспозиция - 30 мин.; период наблюдений - 24 час.

Продолжительность остаточного действия препарата (в сутках)

до полной детоксикации; определение ОТ₅₀ (</> 8 часов);

6.1.8. Опасность препарата в условиях регламентированного применения по результатам лабораторных исследований:

6.1.8.1. Класс токсичности ДВ и ПФ в лабораторных условиях:

(по наименьшей величине ЛД₅₀ контактного или орального воздействия)

Чрезвычайно высоко токсично - < 0,1 мкг/пчелу
Высоко токсично - 0,1-1,0 мкг/пчелу
Умеренно токсично - 1-10 мкг/пчелу
Слабо токсично - 10-100 мкг/пчелу
Практически не токсично - > 100 мкг/пчелу

6.1.8.2. Коэффициент риска:

В расчет берется максимально рекомендуемая гектарная норма препарата в граммах ДВ на гектар и наименьшие величины ЛД₅₀ ДВ (в мкг/пчелу) при контактном (конт.) и оральном (ор.) воздействиях.

При проявлении более высокой токсичности ПФ в сравнении с ДВ в расчет берется максимально рекомендуемая гектарная норма препарата в граммах ПФ на гектар и наименьшие величины ЛД₅₀ ПФ (в мкг/пчелу) при контактном (конт.) и оральном (ор.) воздействиях.

Коэффициенты риска - КР:

- контактного воздействия - КРк = максимальная гектарная норма/ ЛД₅₀ конт.

- орального воздействия - КРо = максимальная гектарная норма/ ЛД₅₀ ор.
по коэффициентам риска определяют КЛАСС ОПАСНОСТИ -

(по наибольшей величине КР контактного или орального воздействия)

Высоко опасен - КР > 50

Средне опасен - КР = 26-49

Мало опасен - КР < 25
6.1.8.3. При принятии окончательного решения учитываются также показатели репеллентного и фумигантного воздействия на пчел, продолжительность остаточного действия, результаты дополнительных исследований по п.8.1. и 8.2., а также особенности поведения препарата и его ДВ в окружающей среде.

6.1.9. Рекомендации по обеспечению максимальной безопасности применения препарата и снижению возможного риска от его использования.

В произвольной форме (время применения препарата в течение суток, длительность изоляции пчел, учет погодных условий, добавление репеллентов, окашивание периметра поля, использование препаратов в теплицах, учет засоренности обрабатываемого поля цветущими сорняками и т.д.)

6.2. Параметры токсичности препаративной формы для семей медоносных пчел Apis mellifera в естественных, в изоляторах, туннелях и в полевых условиях.

(для препаратов, коэффициент риска которых при контактном или оральном воздействии > 50 и используемых на стадиях бутонизации и цветения медоносных и пыльценосных растений в открытом грунте и в теплицах с использованием насекомых-опылителей; регуляторов роста насекомых)

6.2.1. Посещаемость пчелами обработанных растений; активность при сборе нектара и пыльцы с обработанных растений в сравнении с контролем.

6.2.2. Динамика гибели лётных, ульевых пчел и расплода; количество погибших лётных, ульевых пчел, личинок, куколок по суткам со дня применения препарата и гибель пчелиной матки.

6.2.3. Сроки детоксикации препарата на обработанных растениях.

6.2.4. Общее физиологическое состояние семей пчел в ходе испытаний и в послеиспытательный период (включая зимовку и результаты весенней ревизии семей пчел) на фоне проведения плановых зоотехнических и ветеринарных мероприятий.

изменение поведенческих рефлексов пчел;
работоспособность пчелиной матки;
динамика общего развития семей пчел и пчелиного расплода;
безопасность собираемого нектара и пыльцы для молодых ульевых пчел и расплода;
количество погибших пчел за время зимовки и результаты весенней ревизии семей;
другие показательные тесты оценки воздействия пестицида

6.2.5. Методика(и) определения остаточных количеств препарата в кормовых запасах пчел (мед, перга) и в пчелином воске.

6.2.6. Динамика накопления/распада остаточных количеств препарата в продуктах пчеловодства.

6.2.7. МДУ остаточных количеств препарата в кормовых запасах пчел и в пчелином воске.

6.2.8. Отчет о биологических испытаниях по вышеперечисленным показателям и рекомендации по снижению риска от воздействия препарата.

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

Инструкция по профилактике отравления пчел пестицидами" М., ГАП СССР 1989 г.
Основные методические требования к постановке экспериментов в пчеловодстве. Современные методы исследования патологии пчел М., ВАСХНИЛ, 1971
Титов В.Ф., Васьков Н.А., Столбов Н.М., Петухов Р.Д., Соловьева Л.Ф., Степанишвилли В.Г. (1989) Методические рекомендации по изучению токсического действия пестицидов и биопрепаратов на пчел М., ВАСХНИЛ
Atkins, E.L., Greywood, E.A., Macdonald, R.L., (1973) Toxicity of pesticides and other agricultural chemicals to honey bees. Laboratory studies. Univ. Calif., Div. Agric. Sci. Leaf. 2287, 38 p
Barnavon, M., Borneck, R., (1987) Toxicite des insecticides sur les abeilles La Belgique apicole, 51(4), 91-96; (8), 199-206
EC/EEC (1996) Comission directive 96/12/EEC of 8 march 1996 /ameindig Council directive 91/414/EEC concerning the placing of plant protection products on the market/. Official Journal of the European Communities NoL65/20 of 15.3.96.
Good Laboratory Practice, German Chemicals Act, @19a, Bundesgersetzblatt 1703-1732, 25 July 1994
Gough, H.J., McIndoe, E.C., Lewis, G.B. (1994) The use of dimethoate as a reference compound in laboratory acute toxicity tests on honey bees (Apis mellifera L.) 1981-1992. Journ. of Agricultural Research, 33(2), 119-225.
Louveaux J. (1982) Methodes d'essais destinees a connaitre les effets des insecticides sur l'abeille domestique (Apis mellifica L.). Societe francaise de phytiatrie et de phytopharmacie. Commission des essais biologiques. Avril.
OEPP/EPPO (1992) Guideline on test methods for evaluating the side-effects of plant protection products on honeybees. Bulletin OEPP/EPPO 22 (2), 203-215.
OEPP/EPPO (1993) Decision-making scheme for the environmental risk assessment of plant protection products. Bulletin OEPP/EPPO 23, 151-165.
Oomen P.E. & Gerig L. (1993) Method for testing the duration of activity on honeybees of residues on leaves. Bulletin OEPP/EPPO 23
Oomen P.A., de Ruijter, A., Van der Steen, J. (1992) Method for honeybee feeding tests with insect growth-regulating insecticides. Bulletin OEPP/EPPO 22, 613-616.
Shires S.W., Le Blank, I., Debray, P., Forbes, S & Louveaux, J. (1984) Field experiments on the effects of a new pyrethroid insecticide WL-85871 on bees foraging artificial aphid honeydew on winter wheat. Pesticide Science 15, 543-552.
Stute, K. (1980) Uswirkungen von pflanzenschutzmitteln auf die honigbiene Biologische Bundesanstalt fur Land- und Forstwirtschaft Bundesrepublik Deutschland, 20 pp

РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ СЕЛЬСКО-ХОЗЯЙСТВЕННЫХ НАУК

МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

ПО ОЦЕНКЕ ДЕЙСТВИЯ

И ПОТЕНЦИАЛЬНОЙ ОПАСНОСТИ ПЕСТИЦИДОВ

ДЛЯ МЕДОНОСНЫХ ПЧЕЛ

Москва 2000

ТРЕБОВАНИЯ К ПРЕДСТАВЛЕНИЮ ДОКУМЕНТАЦИИ ПРИ РЕГИСТРАЦИИ

ПЕСТИЦИДОВ (СРЕДСТВ ЗАЩИТЫ И РЕГУЛЯЦИИ РОСТА РАСТЕНИЙ),

МЕТОДИКИ ИХ ЭКОЛОГИЧЕСКОЙ ВЕТЕРИНАРНО-САНИТАРНОЙ ОЦЕНКИ

И ПРЕДУПРЕЖДЕНИЯ ВОЗМОЖНОЙ ОПАСНОСТИ ДЛЯ МЕДОНОСНЫХ ПЧЕЛ

/перерасчет ЛД50 теплокровных животных на вес пчелы (0,1 г)/

= 100 - (О х 100 / К)

где:

О - количество сахарного сиропа, потребленного пчелами из опытной кормушки;

К - количество сахарного сиропа, потребленного пчелами из контрольной кормушки;

расчет КЗД делается для каждой из указанных концентраций

6 Ветеринарно-санитарная экотоксикологическая оценка опасности пестицида для пчеловодства.

6.1. Параметры острой токсичности действующего вещества и препаративной формы для взрослых медоносных пчел Apis mellifera.

6.1.1. Острая контактная токсичность действующего вещества (ДВ) при индивидуальном или групповом воздействии:

6.1.2. Острая пероральная токсичность ДВ при индивидуальном или групповом скармливании:

6.1.3. Острая контактная токсичность препаративной формы (ПФ) при индивидуальном или групповом воздействии:

6.1.4. Острая пероральная токсичность ПФ при индивидуальном или групповом скармливании:

6.1.5. Фумигантная токсичность ПФ при групповом воздействии:

6.1.6. Репеллентная активность ПФ при групповом воздействии:

Дозы: 1,0-0,1 рабочей концентрации препарата в сахарном сиропе; период наблюдений - 48 час.

Процент потребления корма с препаратом в сравнении с чистым сиропом - Коэффициент Защитного Действия (КЗД)

6.1.7. Дополнительные параметры токсичности ПФ в лабораторных условиях

(не требуется для препаратов, ЛД₅₀ ДВ и ПФ которых при топикальном и оральном воздействии более 100 мкг/пчелу)

6.1.7.1. Хроническая пероральная токсичность ПФ при групповом скармливании:

Дозы: 0,5 и 0,25 ЛК₂ при экспозиции до 30 суток.

Средняя продолжительность жизни (ПЖ) в сутках опытных групп пчел в сравнении с контролем (М+м) для каждой дозы

6.1.7.2. Продолжительность остаточного действия ПФ на стеклянной поверхности при групповом контактном воздействии:

Дозы: расходная норма препарата на 100 см²; экспозиция - 30 мин.; период наблюдений - 24 час.

Продолжительность остаточного действия препарата (в сутках)

до полной детоксикации; определение ОТ₅₀ (</> 8 часов);

6.1.8. Опасность препарата в условиях регламентированного применения по результатам лабораторных исследований:

6.1.8.1. Класс токсичности ДВ и ПФ в лабораторных условиях:

(по наименьшей величине ЛД₅₀ контактного или орального воздействия)

Чрезвычайно высоко токсично - < 0,1 мкг/пчелу
Высоко токсично - 0,1-1,0 мкг/пчелу
Умеренно токсично - 1-10 мкг/пчелу
Слабо токсично - 10-100 мкг/пчелу
Практически не токсично - > 100 мкг/пчелу

Определение коэффициентов риска (КР)

контактного (КРк) и орального (КРо) воздействия

пестицидов на пчел.

Для определения КР берется максимально рекомендуемая гектарная норма препарата (в граммах действующего вещества) и наименьшие величины ЛД₅₀ (в мкг /пчелу) при контактном и оральном воздействии ДВ / ПФ.

Расчет КР проводят по формуле:

КРк = Максимальная гектарная норма / ЛД₅₀ контактного действия

КРо = Максимальная гектарная норма / ЛД₅₀ орального действия

По наибольшей величине КР определяют класс опасности:

Класс опасности	Величина КР
	ЕЭС	Россия

Высоко опасен	> 50	> 50
Средне опасен		25-50
Мало опасен	< 50	< 25

При принятии окончательного решения учитываются также показатели репеллентного и фумигантного воздействия на пчел, продолжительность остаточного действия, результаты дополнительных исследований, а также особенности поведения препарата и его ДВ в окружающей среде.

№ _ _ _ _ _ _ _ от “_ _” _ _ _ _ 2000 г.
на № _ _ _ _ _ _ от “_ _” _ _ _ _ 2000 г.

Академику-секретарю

отделения ветеринарной

медицины РАСХН

А.М. Смирнову

[ направление документов на утверждение ]

Направляем Вам для рассмотрения и утверждения “Методические рекомендации по оценке действия и потенциальной опасности пестицидов для медоносных пчел”, разработанные сотрудниками специализированных лабораторий ВНИИВСГЭ, ВИЭВ и НИИ пчеловодства.

Приложение:
1. Методические рекомендации на 19 стр. - 1 экз.

2. Выписка из протокола заседания Секции

“Патология пчел, рыб и охрана гидробионтов”

Отделения ветеринарной медицины РАСХН на 1 стр. - 1 экз.

Заместитель директора

института В.В.Ивановцев

Исп. С.Н.Луганский

256-6946

РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ НАУК